Hepatitis serodiagnosis

Laat een reactie achter 1,249

Om het hepatitis-virus te bepalen, om informatie te verkrijgen over de oorsprong van de ziekte, de omstandigheden en oorzaken van voorkomen, wordt serodiagnose van hepatitis C, b, a uitgevoerd. Identificatie van serologische markers stelt u in staat om een ​​diagnose te stellen en de juiste behandeling te nemen. De markers omvatten virale eiwitten, specifieke antilichamen, die het lichaam produceert als een reactie op de infectie en de virusnucleïnezuren.

Wat is het?

Serodiagnosis - herkenning van de etiologie van ziekten door antilichamen in het bloed te detecteren. Serologische markers zijn late diagnostiek, aangezien reacties 10-12 dagen na het begin van de ziekte mogelijk zijn. Serodiagnostische studies worden uitgevoerd om:

  • diagnose van de ziekte - om de aanwezigheid van antilichamen in het bloed te bepalen, met behulp van standaardantigenen;
  • identificeer de ziekteverwekker - om onbekende antigenen te identificeren.

Gebruik voor serodiagnose: bacteriële cellen; plasmacellen en lymfocyten, tumorcellen en zieke cellen; oplosbare ingrediënten. Er zijn 6 groepen van serologische reacties:

  1. Reacties die optreden met de vergroting van Ag-deeltjes.
  2. Complementeer bindingsreacties en immuun hemolyse.
  3. Immunofluorescentiereactie.
  4. Anti-neutralisatiereacties
  5. Reactie met fagocytose.
  6. Reacties van immunosorbensanalyse met behulp van antigenen en antilichamen.
Terug naar de inhoudsopgave

Wat laat de analyse zien?

Serodiagnose uitvoeren voorgeschreven aan patiënten, als het om een ​​of andere reden niet mogelijk is om een ​​diagnose te stellen, met uitzondering van de ziekte. De analyse identificeert het type ziekteverwekker en helpt om een ​​diagnose te stellen. Met serodiagnose kunt u ook de beste behandelingsoptie kiezen. Symptomen voor het testen: onredelijke aanvallen van zwakte, slechte eetlust, misselijkheid, verkleuring van uitwerpselen en urine, gele huid. Tijdige serodiagnose bevestigt of ontkent infectie en bepaalt het stadium van de ziekte.

Kenmerken van serodiagnose en type hepatitis

De schil van elk virus heeft zijn eigen set eiwitten. En de aminozuren waaruit het eiwit bestaat, worden als een soort codeset beschouwd. Deze code is een marker voor serodiagnose. Hepatitis A-markers zijn anti-HAV IgM en IgG. Markers van hepatitis B - HBcAg, HBsAg, HBeAg. De markers van het virus C - HBCAg. Voor serodiagnose van virus A worden de volgende gebruikt: IEM (immuno-elektronenmicroscopie), CSC (complementbinding), RIA (gebruik van gemerkt anti en Ag), REMA (antilichaam enzymreactie). Serodiagnosis voor virus B gebruikt RIA, REMA, RPG (precipitatie in gel) en RIGA (indirecte hemagglutinatie). RIGA gebruikt erytrocyten die zijn geladen met HBsAg. Voor serodiagnose van hepatitis C gebruikte enzym immunoassay.

Hepatitis A-markers

De hepatitis A-studie is gericht op het bepalen van IgM en IgG. Deze indicatoren verschijnen in het bloed zodra het niveau van serumenzymen in het lichaam toeneemt. Anti-HAV IgM - is een indicator voor het gehalte aan antilichamen M aan het hepatitis-virus. Na infectie groeit de indicator en tot de eerste symptomen verschijnen, zal een bloedtest een positief resultaat laten zien. Anti-HAV IgG - deze klasse wordt 10 weken na infectie in het lichaam bepaald. De indicator blijft meestal hoog na herstel, dit geeft aan dat het proces van vorming van immuniteit tegen type A-virus begint.

Met behulp van de HBsAg-marker kan hepatitis B in een vroeg stadium worden opgespoord: het antigeen verschijnt op dagen 27-41 nadat de infectie het lichaam is binnengedrongen.

Hepatitis B-markers

De studie heeft tot doel antigenen en antilichamen te identificeren. Met serodiagnose kunt u een diagnose stellen en de gevolgen van de ziekte voorspellen. Voor elke fase wordt een andere HBV-marker gedetecteerd. Tijdens de incubatieperiode wordt het antigeen gedurende 2 tot 5 maanden in het bloed bewaard. Een indicator van infectie is de gelijktijdige bepaling van HBs en HB's. Aan het begin van het herstel verdwijnen HBc en HBe uit het bloed, wordt anti-HBc gevormd, later worden antilichamen tegen alle soorten antigeen in het bloed gedetecteerd. De aanwezigheid van HbsAg duidt op infectie, als het antigeen meer dan zes maanden in het bloed is, dan bevindt de ziekte zich in een chronische fase. Anti-HbsAg - laat zien dat antilichamen zich in het lichaam hebben gevormd en dat het immuunsysteem actief tegen het virus vecht. HbsAg wordt enige tijd na herstel gedetecteerd. Anti-HbcAg wordt gedetecteerd met symptomen en gaat door gedurende de gehele periode.

In laboratoriumonderzoek worden twee klassen antilichamen gedetecteerd: IgM - wordt gesynthetiseerd in de vroege stadia en is een teken van recente infectie of hoge activiteit van het virus. IgG - gevormd 2-3 maanden na infectie, biedt immuniteit. De HbeAg-indicator geeft de infectieactiviteit aan. Patiënten met antigenen in hun bloed zijn gevaarlijk om het virus over te dragen, dus wees voorzichtig. Wanneer Anti-HbeAg wordt gedetecteerd, begint de immuniteit zich te vormen.

Hepatitis C-markers

Hepatitis C-virus repliceert inactief, dus er zijn problemen bij de diagnose van infectie. De enige manier om het C-virus te detecteren is om RNA te detecteren. De bepaling ervan wordt uitgevoerd door een enzymimmunoassay, waarbij de hoeveelheid anti-HCV wordt bepaald. Antilichamen worden 4-6 weken nadat het virus in het bloed komt gedetecteerd. Tijdens deze periode begint de vorming en circulatie van IgM. Na 3 maanden begint de IgG-synthese. Langdurige detectie van IgM geeft de activiteit van het virus en het chronische stadium van de ziekte aan. In de chronische vorm duidt de detectie van IgM leverschade aan. Het resultaat van een enzymimmunoassay is geen basis voor diagnose, de methode wordt gebruikt als screeningstest om de chronische vorm te identificeren. Nadat antilichamen tegen HCV en voor vermoedelijke hepatitis C zijn gevonden, moet een uitgebreid laboratoriumonderzoek worden uitgevoerd.

Een enzymimmunoassay voor serodiagnose kan antilichamen tegen hepatitis C detecteren in 95% van de gevallen van de chronische vorm, in de acute vorm is de nauwkeurigheid van de methode 50-70%.

Serodiagnose heeft geen 100% specificiteit en gevoeligheid bij de diagnose van virale hepatitis. Daarom is het bij het evalueren van de resultaten noodzakelijk om rekening te houden met de symptomen en verschillende tests te gebruiken om het resultaat te diagnosticeren. Bij het evalueren van de resultaten van serologische onderzoeken moet rekening worden gehouden met de geschiedenis van de ziekte, informatie over ziekten in het verleden en vaccinaties, en met mogelijk contact met de bron van infecties.

Serologische diagnose van virale hepatitis

De diagnose begint met het onderzoek van de patiënt. Voor een juiste en tijdige diagnose van 'virale hepatitis', onderzoeken artsen eerst de patiënt en vragen hem bloed- en urinetests af te nemen.

Allereerst letten ze op dergelijke kenmerkende symptomen van de beginperiode van de ziekte, zoals lethargie, algemene spierzwakte, verlies van eetlust, misselijkheid, buikpijn, donker worden van de urinekleur, vergroting en verdikking van de lever, toenemende pijngevoeligheid van de onderrand. Over het algemeen besteden de analyses van bloedartsen aandacht aan het gehalte aan leukocyten, lymfocyten, ESR.

Ze nemen hun toevlucht tot biochemische bloed- en urinetests om de mate van leverschade te bepalen en om te bevestigen of geelzucht gepaard gaat met ontsteking van de lever. Het belangrijkste is het niveau van galpigment - bilirubine, dat in de lever wordt gevormd als gevolg van de afbraak van rode bloedcellen.

Normaal gesproken is bilirubine gebonden aan bloedeiwitten en heeft het geen toxisch effect op de lichaamsweefsels. Bij hepatitis stijgt de concentratie vrij en gebonden bilirubine in het bloed sterk. Wanneer het 200-400 mg / l overschrijdt, wordt geelzucht zichtbaar voor het oog.

Hepatocytenbeschadiging spreekt van een toenemende mate van transaminase-activiteit - ALAT en AST, die via beschadigde membranen het bloed van levercellen binnendringen. Er zijn ook speciale tests voor de staat van het bloedcoagulatiesysteem, waarbij eiwitten gesynthetiseerd in de lever zijn betrokken. Een positieve reactie van urine op urobilin heeft een diagnostische waarde.

Bewijs van verminderde leverfunctie is een thymol-test. Een verandering in de protrombinecijfer kenmerkt de ernst van virale hepatitis, en een toename van de activiteit van alkalische fosfatase, totaal bilirubine, duidt op een schending van de secretoire functie van de lever. De reactie van urine op galpigmenten in het begin van de ziekte is veel minder positief.

Bij de diagnose van niet gering belang, worden zowel acute als chronische vormen van virale hepatitis gegeven aan ultrageluidonderzoek van de buikholte-organen. Met behulp van deze methode kunnen artsen dergelijke veranderingen vaststellen die niet worden gedetecteerd door extern onderzoek: vergrote lever, vernauwing van de leveraders, verharding en verdikking van hun wanden, tekenen van ontsteking van de galblaas en pancreas, verwijde portaal en miltaders, vergrote milt, vergrote lymfeklieren. De belangrijkste diagnostische methode, vooral chronische hepatitis, is een leverbiopsie.

Werkwijzen voor het detecteren van antilichamen en antigenen in het bloed en andere lichaamsvloeistoffen omvatten serologische diagnostiek. Voor de vroege diagnose van virale hepatitis, inclusief anictische, asymptomatische vormen, wordt de aanwezigheid van virale eiwitten (antigenen, ook wel virale hepatitis-markers genoemd) of antilichamen tegen hen met behulp van immunoenzym-analyse (ELISA) in het serum bepaald. Bovendien wordt ELISA waar mogelijk aangevuld met een polymerasekettingreactie (PCR), die het mogelijk maakt om de aanwezigheid van virale nucleïnezuren in het serum - DNA van het hepatitis B-virus, RNA-virussen van andere hepatitis te bepalen, wat vooral belangrijk is voor het begin van tijdige behandeling.

Enzym-linked immunosorbent assay (ELISA) - is een universele methode voor immunologische diagnose, die in de praktijk veel wordt gebruikt. Het is ontworpen om virale eiwitten (antigenen) of antilichamen te detecteren die door het immuunsysteem worden geproduceerd als reactie op de penetratie van virussen in het menselijk lichaam. Deze eiwitten zijn merkwaardige markers (tags) of tekens, waarvan u de aanwezigheid kunt vaststellen om een ​​juiste diagnose te stellen, de aard van de ziekte te beoordelen en uw arts te helpen bij het kiezen van de juiste behandeling. Deze methode is gebaseerd op de welbekende interactie tussen antigeen en antilichaam.

Om antigenen te identificeren, produceren verschillende handelsbedrijven testsystemen die polystyreenplaten met 96 putjes zijn. Aan de onderkant van de putjes worden antilichamen vooraf geadsorbeerd ("gehecht") aan een of ander antigeen van het pathogeen, bijvoorbeeld aan het oppervlakteantigeen van het hepatitis B-virus - HBs-antigeen.

In de eerste stap wordt toegevoegd aan elk putje van monster, bijvoorbeeld patiënteserum in verschillende verdunningen die tot een specifiek viraal eiwit (antigen). Als dit eiwit (antigeen) zijn antilichaam herkent, treedt hun binding op. Dit betekent dat het serum van de patiënt het antigeen bevat, antilichamen waarvoor de onderkant van de plaat wordt gesorbeerd.

Om de resultaten van deze reactie te zien, is er de volgende stap, waarbij een verbinding wordt toegevoegd aan het "antigeen-antilichaam" -complex dat aan het antilichaam bindt. Deze verbinding bevat een enzym zoals mierikswortelperoxidase. Wanneer er een substraat aan wordt toegevoegd, wordt de laatste gesplitst, waarna de oplossing in een geelbruine kleur wordt gekleurd.

In de volgende stap wordt elk putje grondig gewassen van niet-gereageerde componenten. In die putten waar het antigeen, zoals in ons geval, volledig aan het antilichaam is gebonden, kan het niet langer een interactie aangaan met de toegevoegde verbinding.

Daarom wordt het tijdens het wassen uit de put verwijderd. Als het serum wordt verdund, neemt het gehalte aan antilichamen daarin af en zijn ze niet langer in staat om het antigeen volledig te binden. In deze putjes bindt de verbinding die het enzym bevat aan het antigeen en blijft na wassen in de put. Voeg in het volgende stadium het substraat toe en bekijk de resultaten van de reactie, die visueel wordt beoordeeld of met behulp van een spectrofotometer.

We vonden dus dat het serummonster van de patiënt HBs-antigeen bevat. U kunt ook de hoeveelheid of titer ervan vinden, waarbij de laatste verdunning van het serum wordt bepaald, waarbij een gele kleur verschijnt. Hoe groter de mate van verdunning, hoe meer het virus in het bloed van de patiënt zit.

Evenzo kan de aanwezigheid van antilichamen tegen een bepaalde veroorzaker van virale hepatitis worden bepaald. Alleen in deze gevallen worden diagnostische testsystemen met "genaaid" naar de bodem van de wells gebruikt, niet met antilichamen, maar met bekende antigenen. De voordelen van deze methode zijn hoge gevoeligheid en specificiteit, reactievermogen, de mogelijkheid om een ​​groot aantal patiënten tegelijkertijd te onderzoeken. Tot de tekortkomingen van de methode behoren de behoefte aan speciale dure apparatuur en passende kwalificaties van het personeel.

Polymerase kettingreactiemethode

In de moderne laboratoriumdiagnostiek neemt PCR een speciale plaats in. De PCR-methode verhoogde de klinische laboratoriumdiagnostiek tot een fundamenteel andere hoogte - het niveau van bepaling van nucleïnezuren (DNA en RNA), wat directe detectie van een infectieus agens of genetische mutatie in elk biologisch medium mogelijk maakt.

Bij deze PCR-methode kan theoretisch één gewenst nucleïnezuurmolecuul onder miljoenen anderen worden gedetecteerd. Vanuit het oogpunt van klinische geneeskunde is de definitie van nucleïnezuur equivalent aan de detectie van het pathogeen in het onderzoeksobject.

Het is bekend uit de biologie dat nucleïnezuren (DNA of RNA) de eigenschap van zelfreproductie (reproductie) bezitten. Dit principe ligt ten grondslag aan de PCR-methode, wanneer dit proces kunstmatig in het laboratorium wordt uitgevoerd. Hiervoor wordt eerst een nucleïnezuur geïsoleerd uit een weefselmonster dat van een patiënt is verkregen (bijvoorbeeld in het geval van vermoede virale hepatitis).

Het vervult de rol van een soort "matrix" waarop de synthese wordt uitgevoerd. Nucleïnezuur heeft zijn eigen "imprint" - een unieke sequentie van nucleotiden waaruit het bestaat. Voor elke ziekteverwekker is een dergelijke sequentie bestudeerd, een soort "kaart" is gecompileerd.

Het belangrijkste element in de PCR is de primer (korte coupes van DNA complementair (corresponderend) met de gebieden van het nucleïnezuur geïsoleerd uit het monster). Primers bieden start-up en specificiteit van de reactie.

Dus het testsysteem voor de PCR uit een mengsel van het monster nucleïnezuur primer en specifieke enzymen (polymerasen)) waarbij deze reactie is niet mogelijk. PCR-analyse omvat verschillende cycli (stappen), waardoor exacte kopieën van een herkenbaar gebied van het templatenucleïnezuur worden verkregen. Deze cycli worden 30-50 keer herhaald in overeenstemming met een bepaald programma. Het eindproduct van deze reactie wordt herkend door gelelektroforese.

"Gevoeligheid" -indicator

Een van de belangrijkste criteria voor de diagnostische effectiviteit van een laboratoriumanalyse is de indicator "gevoeligheid". Het moet onderscheid maken tussen analytische en diagnostische gevoeligheid. Analytische gevoeligheid, zoals toegepast op PCR, is het minimumaantal kopieën van DNA of RNA in 1 ml monsteroplossing, wat door dit testsysteem kan worden bepaald.

De meeste commerciële testsystemen kunnen het gewenste nucleïnezuur in een biologisch monster detecteren, zelfs als de concentratie ervan enkele honderden kopieën per 1 ml monster is. Dit hangt samen met de algemene situatie die de klinische geschiktheid van laboratorium diagnostische methoden of testsystemen bepaalt - de diagnostische gevoeligheid van de methode mag niet lager zijn dan 95-98%.

Het tweede universele criterium van laboratoriumeffectiviteit is 'specificiteit', wat wordt bepaald door het percentage gezonde mensen dat echt negatieve analyseresultaten heeft. De PCR-methode heeft de hoogste specificiteit, die 99-100% bereikt.

De diagnostische gevoeligheid en specificiteit van PCR zijn vergelijkbaar en vaak superieure prestaties geleverd door andere methoden, die de "gouden standaard" in de diagnostiek van infectieziekten.

PCR-resultaten zijn verkregen binnen één werkdag, geselecteerd voor analyse monster kan worden opgeslagen (cumulatief) gedurende enkele weken, zelfs bij geschikte temperatuur normen. Een samengevatte beoordeling van de gevoeligheid van verschillende recent uitgevoerde diagnosemethoden in verschillende buitenlandse onderzoekscentra wees uit dat de ELISA een gevoeligheid van 50-70% en PCR heeft - van 90 tot 100%.

PCR in vergelijking met andere werkwijzen en ELISA, heeft twee belangrijke voordelen: hoge gevoeligheid en korte duur van de analysetijd, d.w.z. "relevantie" Onderzoeksresultaten arts en patiënt.

Vóór andere methoden voor klinische laboratoriumdiagnostiek zijn er voordelen van PCR:

- De methode maakt het mogelijk DNA en RNA te detecteren, zelfs in gevallen waarin andere methoden niet mogelijk zijn;

- de methode heeft een hoge specificiteit (tot 100%). Het is te wijten aan het feit dat in het bestudeerde materiaal een uniek nucleïnezuurfragment wordt gevonden dat alleen kenmerkend is voor een bepaald pathogeen of gen;

- de mogelijkheid om niet alleen kwalitatieve (beschikbaarheid), maar ook kwantitatieve (concentratie) beoordeling van het gehalte aan nucleïnezuur uit te voeren. Op dit moment is het mogelijk om met behulp van commerciële testsystemen enkele honderden exemplaren in de onderzochte steekproef te bepalen;

- hoge produceerbaarheid en automatisering van de methode laten de arts toe om de resultaten van het onderzoek te krijgen en de patiënt op de dag van de analyse met hen te delen;

- PCR maakt het mogelijk het pathogeen in het lichaam te identificeren vóór de ontwikkeling van de ziekte, bijvoorbeeld in de incubatieperiode;

- voor het uitvoeren van PCR-analyse is een minimaal monstervolume voldoende (tot enkele microliter);

- Met PCR-analyse kunt u tegelijkertijd meerdere pathogenen in één monster diagnosticeren, zonder afbreuk te doen aan de gevoeligheid of specificiteit van het resultaat;

- De verkregen resultaten van PCR kunnen worden ingevoerd in computerinformatiedragers of worden gefotografeerd voor verdere evaluatie door onafhankelijke deskundigen.

Ondanks de bovenstaande voordelen, is de PCR-methode nog steeds niet zonder enige nadelen die in overweging moeten worden genomen bij het evalueren van onderzoeksresultaten:

- de hoogste eisen voor laboratoriumapparatuur, de kwaliteit van testsystemen en de meest strikte naleving van onderzoeksvoorschriften om valse resultaten te voorkomen. Het oplossen van het probleem van de kwaliteit van analyses is mogelijk met geschikte kwalificaties van personeel en verplichte certificering van het laboratorium;

- ambigue beoordeling van een positief PCR-resultaat. Het is dit feit dat vaak een onredelijk argument is van beoefenaars om te twijfelen aan het verkregen resultaat en de effectiviteit van de PCR-methode. Bij individuen met het DNA van het pathogeen dat door de PCR-werkwijze in het bloed wordt gedetecteerd, kan de ziekte bijvoorbeeld niet klinisch ontwikkelen.

In deze situatie, bij het evalueren van PCR-analyse, zou men moeten spreken over een geïnfecteerde patiënt, en niet over de ontwikkeling van een infectieziekte. De methode van PCR-analyse maakt het mogelijk om de aanwezigheid of afwezigheid van het pathogeen te bepalen, beantwoordt grotendeels de vraag "behandel geen behandeling" en maakt het ook mogelijk om de kwaliteit van de behandeling te beoordelen door de aanwezigheid of afwezigheid van het pathogeen te bewaken. De arts, die het resultaat van de PCR-analyse evalueert, beseft dat dit resultaat niet het enige argument is bij het nemen van de beslissing om de behandeling te starten of om het te weigeren.

Er zijn testsystemen ontwikkeld voor elk type virale hepatitis-pathogeen, maar de meest waardevolle methode van PCR werd gevonden in de diagnose van hepatitis B, C, D, G. De PCR-methode is uitermate belangrijk voor de diagnose van hepatitis B. Dit komt door het feit dat een van de vele varianten van dit virus er zijn mutanten (met veranderde eigenschappen), die niet worden bepaald door conventionele serologische tests.

PCR analyse methode kunnen identificeren, en elke vorm van hepatitis B virus 15, of hij zelfstandig kan repliceren of geïntegreerde (ingebouwd) in het DNA van de gastheercel. Dit is van kritisch klinisch belang, omdat iemand met de integrerende vorm van deze infectie niet besmettelijk is voor anderen (veiligheid voor de seksuele partner, professionele fitheid, er is geen risico op verticale overdracht van het virus van moeder op foetus, enz.).

Bovendien is antivirale therapie voor dergelijke patiënten niet geïndiceerd, bovendien is het zelfs gevaarlijk. Met een integrerende vorm van infectie neemt de kans op het ontwikkelen van leverkanker echter dramatisch toe (met meer dan 200 keer). Zulke mensen moeten minstens eenmaal per jaar een uitgebreid klinisch, laboratorium- en instrumentaal onderzoek ondergaan.

De PCR-methode kan als scheidsrechter fungeren om de noodzaak te bepalen om de behandeling te starten en de effectiviteit ervan te controleren. De snelle verdwijning van hepatitis B-virus-DNA uit bloed is een directe en betrouwbare test van het succesvolle resultaat van antivirale behandeling.

Aldus bepaling van HBV DNA in plasma is een belangrijke analyse die in combinatie met andere laboratoriumtests maakt objectief infectie te diagnosticeren, bepalen de aard van het infectieproces, om als criterium bij de therapie en evaluatie van de doeltreffendheid.

PCR methode geen gelijke bij de diagnose, prognose en de beoordeling van het succes van antivirale therapie van infecties door hepatitis C. Het gebruik van PCR kan het hepatitis C-virus in een vroeg stadium van de infectie, als HCV RNA reeds kan worden gedetecteerd in het bloedserum een week na infectie. Met deze methode worden de genetische variëteiten van dit virus bepaald, waardoor de arts de juiste behandeling kan voorschrijven.

In het geval van virale hepatitis D maakt de PCR-analysemethode de bepaling van viraal RNA in het serum van de patiënt mogelijk, evenals gemengde hepatitis B- en D-infectie. Daarom kan deze onderzoeksmethode worden gebruikt om de effectiviteit van de behandeling, prognose van het beloop en de uitkomst van de ziekte te monitoren. Het is belangrijk voor de arts om te bepalen of er sprake is van een gemengde infectie, aangezien hepatitis D het necrotische effect bij hepatitis B versterkt en daarom het risico op de ontwikkeling ervan verhoogt.

De methode van PCR-analyse is momenteel de enige manier om de aanwezigheid van een infectie met het hepatitis C-virus aan te tonen.

Overweeg het gebruik van diagnostische methoden voor verschillende hepatitis.

Hepatitis E. De belangrijkste diagnostische symptomen van hepatitis E virus zijn: waterige veronderstelling transmissiemechanisme, de leeftijd van de patiënt van 20 tot 40 jaar, de proliferatie voornamelijk in de regio's van tropische en subtropische zone, klinische verschijnselen, zoals hepatitis A met prevalentie van milde, registratie ernstige bedreiging dodelijk uitkomst bij zwangere vrouwen in de tweede helft van de zwangerschap, minder vaak in de vroege postpartumperiode en bij moeders die borstvoeding geven (komen voor bij intensieve hemolyse, hemoglobinurie, acute nieraandoening sufficiëntie en ernstig trombohemorragisch syndroom). Bevestigt de diagnose van de detectie van antilichamen in het bloed.

Virale hepatitis B. Hepatitis B artsen verdacht als ziek 45-180 dagen voorafgaand aan het begin van de ziekte transfusie van bloed of componenten daarvan (erytrocyten, leukocyten, bloedplaatjes massa) werd uitgevoerd chirurgie, studies van de interne, meervoudige injectie (met inbegrip van drug ), of, wat veel minder frequent gebeurt, als de patiënt seksueel of nauw contact heeft gehad met een patiënt met hepatitis B. Het criterium voor vroege bevestiging van de diagnose is de detectie van HBs, HBe en HBc-antigenen in het bloed en viraal DNA.

Serologische markers voor acute hepatitis B

Hepatitis C. In tegenstelling tot hepatitis B, bij de diagnose van welke antigeen- en antilichaammarkers rekening wordt gehouden, met hepatitis C, worden alleen antilichamen gevangen door ELISA, wat geassocieerd is met een lage concentratie van het virus in het bloed. Hepatitis C-virusantigenen kunnen worden gedetecteerd in leverbiopsiespecimens.

Laboratoriumdiagnose omvat drie hoofdtypen tests.

Serologische markers voor acute hepatitis C

Detectie van antilichamen. Ondanks de hoge specificiteit zijn moderne diagnostische enzymimmuuntestsystemen niet verzekerd tegen overdiagnose, dat wil zeggen vertragingspositieve resultaten. Om ze uit te sluiten, is ook een beoordeling vereist op basis van de resultaten van analyses die op verschillende tijdsintervallen zijn verkregen. Vals-negatieve resultaten zijn ook mogelijk wanneer antivirale antilichamen niet kunnen worden gedetecteerd, ondanks de aanwezigheid van een virus in het lichaam. Dit gebeurt in de volgende gevallen:

- de beginperiode van de ziekte;

- terwijl patiënten immunosuppressiva innemen - geneesmiddelen die het immuunsysteem onderdrukken;

- bij infectie met sommige genotypen (allereerst 3 en 4).

Momenteel worden commerciële testsystemen geproduceerd om antilichamen tegen het hepatitis C-virus van het 1e genotype te detecteren. Dergelijke tests zijn mogelijk echter niet voldoende effectief voor betrouwbare detectie van antilichamen bij infectie met een virus met een ander genotype. Dit is van groot belang voor regio's waar andere soorten virussen de overhand hebben. Daarom is een zeer gevoelige test die kan reageren met antilichamen tegen het hepatitis C-virus van een genotype vereist voor een effectieve diagnose van hepatitis C.

Bepaling van viraal RNA. Hepatitis C-virus-RNA wordt gedetecteerd voor diagnostische doeleinden Tot op heden wordt deze test beschouwd als de "gouden standaard" bij de diagnose van hepatitis C. Hiervoor wordt de klassieke versie van de polymerasekettingreactie (PCR) het meest gebruikt. Met zijn hulp is het mogelijk om de reproductie van het virus te volgen, evenals om de aanwezigheid ervan in de lever en andere weefsels te beoordelen. Bepaling van RNA meestal gebruikt om het resultaat van de detectie van antilichamen te bevestigen, stellen een vroege diagnose van acute hepatitis (virale RNA kan worden reeds 7-21 dagen waargenomen na infectie, dat wil zeggen, lang voordat het eerste antilichaam), de zwangere perinatale infectie volgen en monitoring van de effectiviteit van antivirale therapie.

De gegevens van deze twee tests vullen elkaar goed aan. Positieve resultaten van PCR-analyse in combinatie met negatieve resultaten voor antivirale antilichamen zijn kenmerkend voor sommige periodes van acute hepatitis. Negatieve indicatoren van PCR-analyses op de achtergrond van positieve antilichaamtest kunnen te wijten zijn aan een lage (niet detecteerbare in PCR) virusconcentratie in het bloed. Herhaalde positieve PCR-bloedtesten weerspiegelen de activering van het virus in de cellen van de lever of andere organen.

PCR wordt ook gebruikt om het virus in leverweefsel te detecteren dat tijdens biopsie wordt genomen. Dit geeft meer volledige informatie over de ontwikkeling van het infectieuze proces, omdat het virus lange tijd in hepatocyten kan zijn zonder in het bloed te gaan zitten of in lage concentraties aanwezig te zijn. Dit komt meestal voor in de vroege stadia van infectie, maar wordt ook waargenomen bij chronische hepatitis.

Bepaling van de eiwitten (antigenen) van het virus van hepatitis C. De theoretische mogelijkheid van het detecteren van hepatitis C-virus eiwitten werd kort ingesteld na de ontdekking van het virus onder studie immunofluorescentie weefselmonsters uit de lever van patiënten met chronische hepatitis C mensen en chimpansees, geïnfecteerd met het virus.

De bepaling van virale eiwitten (antigenen) in het serum vanwege hun lage gehalte was lange tijd niet mogelijk. Pas recent zijn methodologische benaderingen ontwikkeld voor de immunofermentale detectie van intern C-eiwit in het bloed en de productie van de eerste commerciële testsystemen is georganiseerd. Hun introductie in de praktijk zal het mogelijk maken om controversiële kwesties van diagnostiek op een meer economische basis op te lossen dan de definitie van viraal RNA. Het bepalen van de niveaus van AlAT is de goedkoopste methode voor het beoordelen van de activiteit van het verloop van hepatitis C. Echter, eenmaal verkregen gegevens zijn mogelijk niet voldoende om de ernst van de ziekte te bepalen.

Meer belangrijke informatie over leverbeschadiging kan worden gegeven door de concentratie van ALT gedurende enkele maanden te bepalen. Voor informatie over de omvang van leverbeschadiging die niet beschikbaar is bij andere onderzoeksmethoden, kan een arts een leverbiopsie geven. De gegevens die zijn verkregen als gevolg van deze procedure, maken het mogelijk om te beslissen ten gunste van het starten of annuleren van een antivirale behandeling.

Het artikel maakt gebruik van materialen uit open bronnen: Auteur: Trofimov S. - Boek: "Ziekten van de lever"

ABSTRACT Markerstatus van acute en chronische hepatitis B en C

Federaal Education Agency

Staatsinstelling voor hoger beroepsonderwijs

Ulyanovsk State University

Institute of Medicine, Ecology and Physical Culture

Afdeling Infectieuze en Venereuze huidziekten

Discipline "Infectieziekten"

MARKER DIAGNOSTIEK VAN ACUTE EN CHRONIC HEPATITIS B EN C.

Head. Afdeling: professor.

Federaal Education Agency

Staatsinstelling voor hoger beroepsonderwijs

Ulyanovsk State University

Institute of Medicine, Ecology and Physical Culture

Afdeling Infectieuze en Venereuze huidziekten

Detectie van serologische markers van virale hepatitis.... 3 pagina's

Serodiagnose van virale hepatitis B............................... 4 pagina's

Serodiagnose van virale hepatitis C.....................................10 p

Lijst met gebruikte literatuur................................. 19 pp.

Federaal Education Agency

Staatsinstelling voor hoger beroepsonderwijs

Ulyanovsk State University

Institute of Medicine, Ecology and Physical Culture

Afdeling Infectieuze en Venereuze huidziekten

Detectie van serologische markers van virale hepatitis

Het is mogelijk om de virale aard van hepatitis vast te stellen en informatie over de etiologie te verkrijgen door serologische markers van hepatitis-virussen te identificeren. Dergelijke markers omvatten virale eiwitten (antigenen), specifieke antilichamen geproduceerd door het lichaam in reactie op een infectie en virusnucleïnezuren (DNA of RNA), die het genoom ervan vertegenwoordigen. De combinatie van werkwijzen voor het detecteren van specifieke virale of bacteriële eiwitten (antigenen) of antilichamen geproduceerd in de gastheer in de aanwezigheid van een of ander pathogeen in biologische weefsels en vloeistoffen wordt immunologische werkwijzen voor laboratoriumanalyse genoemd. In de afgelopen decennia zijn immunologische onderzoeksmethoden wijdverspreid. De reden hiervoor was de nauwe fusie van immunologie en biotechnologie, die het mogelijk maakte om een ​​breed scala aan testsystemen te ontwikkelen en in de praktijk te brengen op basis van de interactie van antigeen - antilichaam. Voor virale hepatitis verwijst ELISA naar indirecte methoden voor het detecteren van het pathogeen, waardoor de etiologie van de ziekte kan worden vastgesteld. Relatief recent zijn de methoden van genodiagnostiek geïntroduceerd in de praktijk van klinische diagnostische laboratoria, die de detectie en karakterisering van genen of onzinnige DNA- en / of RNA-sequenties mogelijk maken. Hun ontwikkeling is te danken aan de ontwikkeling in 1983 van het principe van de polymerasekettingreactie (PCR). De eerste rapporten over de praktische toepassing van PCR verschenen in 1985 en sindsdien is het aantal publicaties waarin PCR wordt gebruikt als een van de onderzoeksmethoden een van de eerste plaatsen in de wetenschappelijke wereldliteratuur. Deze benaderingen zijn van toepassing op de detectie en studie van infectieuze genomen

Federaal Education Agency

Staatsinstelling voor hoger beroepsonderwijs

Ulyanovsk State University

Institute of Medicine, Ecology and Physical Culture

Afdeling Infectieuze en Venereuze huidziekten

middelen, detectie van markers van oncologische ziekten, detectie van genetische veranderingen in het menselijk genoom geassocieerd met bepaalde functionele stoornissen. In tegenstelling tot ELISA verwijst PCR-analyse naar directe methoden voor het detecteren van het pathogeen in klinisch materiaal, waarmee de activiteit van het virale proces kan worden geëvalueerd en de verspreidingsprocessen van het pathogeen in verschillende organen en weefsels kunnen worden gevolgd.

Serodiagnose van virale hepatitis B.

Hepatitis B-virus (hepatitis B-virus, HBV) behoort tot de familie Hepadnoviridae. Het genoom van het virus wordt weergegeven door een gedeeltelijk verdubbeld cirkelvormig DNA-molecuul van 3200 bp groot. Onder lichtmicroscopie ziet HBV eruit als een bolvormig deeltje met een diameter van 42 nm (Dane-deeltje) bestaande uit een kern - een nucleotide in de vorm van een icosaëder met een diameter van 28 nm, waarin zich een dubbelstrengs DNA, terminale proteïne en DNA-polymerase-enzym bevinden. Het nucleoïde-eiwit bevat HBcAg en HBeAg. De buitenschil (7 nm dik) wordt gevormd door het HBV-oppervlakte-antigeen - HBsAg. Het hepatitis B-virus is een pseudoretrovirus, d.w.z. zijn DNA kan gedeeltelijk in het hepatocytengenoom worden ingebracht.

Met AVH en exacerbatie van chronische hepatitis kunnen virale deeltjes worden gedetecteerd in de hepatocyten en het serum van de patiënt. Met de integratieve vorm van chronische hepatitis B en in het stadium van remissie, wordt HBV in serum niet gedetecteerd. De basis van laboratoriumdiagnostiek van HBV-infectie is de bepaling van serologische markers van virusinfectie: HBsAg, HBeAg, Igc tegen Igc en IgG, anti-HBe en anti-HBs, HBV DNA en virale DNA-polymerase-activiteit. Afhankelijk van de loop van virale hepatitis B, ziet het spectrum van veranderingen in serologische markers er anders uit.

Federaal Education Agency

Staatsinstelling voor hoger beroepsonderwijs

Ulyanovsk State University

Institute of Medicine, Ecology and Physical Culture

Afdeling Infectieuze en Venereuze huidziekten

HBsAg is een belangrijke marker voor HBV-infectie. In acute virale B kan in de meeste gevallen (90-80%) HBsAg worden gedetecteerd in de incubatieperiode, beginnend vanaf de 3-5e week van infectie. De gemiddelde duur van de antigeencirculatie is 70-80 dagen. Het snel verdwijnen van HBsAg (in de eerste dagen van geelzucht) met het verschijnen van antiBBs is een slecht prognostisch teken. Bij chronische hepatitis B kan HBsAg gedurende vele jaren in het bloed van de patiënt circuleren. Er moet worden opgemerkt dat de momenteel gebruikte methoden voor de bepaling van HBsAg, inclusief ELISA, een gevoeligheidsdrempel hebben. Daarom is het, in aanwezigheid van klinische tekenen van hepatitis en de afwezigheid van HBsAg in het serum, nodig om andere markers van HBV-infectie te onderzoeken. De aanwezigheid van HBsAg in het bloed duidt op de aanwezigheid van een virus in de lever en is zeer waarschijnlijk in het bloed. Niet elk serum dat HBsAg bevat, bevat het hepatitis B-virus In sommige gevallen is het virus-DNA niet volledig geïntegreerd in het hepatocyten-DNA, maar gedeeltelijk alleen in het gebied dat codeert voor HBsAg-synthese. In deze gevallen wordt HBsAg gesynthetiseerd zonder andere componenten van het virion (dat wil zeggen zonder andere antigenen). Er wordt aangenomen dat deze situatie optreedt wanneer de "gezonde" drager HBsAg. HBeAg van het hepatitis B-virus karakteriseert een hoge infectiviteit van het bloed, als een indicator van de actieve replicatie van HBV. HBeAg circuleert alleen in het bloed van de patiënt in de aanwezigheid van HBsAg. In de eerste week van de icterische periode wordt het bij 85-95% van de patiënten gedetecteerd. Detectie van HBeAg gedurende twee maanden of langer dient als een prognostisch teken van de ontwikkeling van chronische hepatitis. Bij de meerderheid van de patiënten met chronische hepatitis met hoge activiteit van het HBeAg-proces, duurt dit lang (tot meerdere jaren). Antilichamen tegen nucleair antigeen van hepatitis-B-virusklasse M (anti-HBc-IgM) - een marker voor actieve replicatie van HBV en acute infectie. Geïdentificeerd 1-2 weken na de ontdekking van HBsAg en blijft gedurende 2-18 maanden aanwezig. Bij 4-20% van de patiënten met acute hepatitis B is anti-HBc IgM de enige marker voor infectie. bij

Federaal Education Agency

Staatsinstelling voor hoger beroepsonderwijs

Ulyanovsk State University

Institute of Medicine, Ecology and Physical Culture

Afdeling Infectieuze en Venereuze huidziekten

CG In anti-HBc IgM kan worden gedetecteerd bij sommige patiënten met lagere titers dan bij acute infectie, waarbij de antilichaamtiter de ernst van hepatitis weerspiegelt. Antilichamen tegen HBcAg klasse G (anti-HBc IgG) verschijnen bijna gelijktijdig met anti-HBc IgM. In de regel blijven ze bij alle personen die voor het leven hepatitis B hebben gehad. Anti-HBc-IgG circuleert samen met HBsAg in 95% van de HBsAg-dragers. Antilichamen tegen HBsAg (anti-HBs) duiden op een eerdere infectie of de aanwezigheid van immuniteit na vaccinatie (beschermingsniveau - 10 IE / ml). Ze verschijnen in de herstelperiode, 4 weken na het verdwijnen van HBsAg, bereiken een maximale concentratie in 1-2 jaar, gevolgd door een geleidelijke afname van het niveau dat ontoegankelijk is voor detectie door moderne diagnostische methoden. In sommige gevallen kunnen anti-HBs voor het leven circuleren. Het uiterlijk van anti-HBs tegen de achtergrond van klinische verbetering bij een patiënt met hepatitis B is een goed prognostisch teken. Het is belangrijk op te merken dat er in de dynamica van acute HBV-infectie een "venster" is wanneer HBsAg niet langer wordt gedefinieerd en anti-HB's nog niet zijn verschenen. Tegelijkertijd worden anti-HBc IgM en IgG gedetecteerd. Hieruit volgt dat het noodzakelijk is om patiënten met AVH voor anti-HBc IgM te onderzoeken, zelfs met negatieve resultaten van het HBsAg- en anti-HBs-onderzoek. Antilichamen tegen HBeAg (anti-HBe) verschijnen in het bloed na eliminatie van HBeAg en voltooiing van virale replicatie. Tegen het einde van de 9e week van de acute periode van hepatitis B, heeft meer dan 90% van de patiënten anti-HBe. Tijdens de herstelperiode kan anti-HBe verdwijnen. De aanwezigheid van anti-HBe is echter geen aanwijzing voor de afwezigheid van infectiviteit van een bepaald serum. Het is aangetoond dat bij een aantal patiënten tijdens de ontwikkeling van hepatitis B (ongeveer 10%), onder invloed van "immuundruk" op het virus, mutante vormen ontstaan ​​die immuunbewaking "vermijden" en niet worden geëlimineerd. Een mutant werd geïsoleerd uit dragers van anti-HBe, niet in staat HBeAg te produceren vanwege defecten in het voorgebied en werd HBeAg-negatief genoemd. Het verschijnen van een HBeAg-negatieve mutant leidt tot de progressie van leverschade wanneer

Federaal Education Agency

Staatsinstelling voor hoger beroepsonderwijs

Ulyanovsk State University

Institute of Medicine, Ecology and Physical Culture

Afdeling Infectieuze en Venereuze huidziekten

voortdurende virale replicatie (aanwezigheid van HBV-DNA in serum). De primaire infectie met HBeAg-negatieve mutant verhoogt significant het risico op fulminante hepatitis. De beschreven hepatitis B-markers worden onderzocht met ELISA. Het spectrum van antilichamen (anti-HBe, anti-HBs, anti-HBc IgM, anti-HBc IgG) en antigenen (HBsAg, HBeAg) stelt u in staat om de diagnose van hepatitis B vast te stellen en het stadium van de ziekte te bepalen (Tabel 3). Het nadeel van deze methode is de onmogelijkheid van het gebruik ervan bij de infectie met mutante vormen van het virus, met immunosuppressie (kankerpatiënten, drugsverslaafden, enz.) En voor de kwantitatieve beoordeling van het pathogeen dat in het lichaam aanwezig is. De oplossing van deze problemen werd mogelijk als gevolg van de introductie van moleculair-biologische methoden in de praktijk van klinische diagnostische laboratoria.

Tabel 3. Verschillende combinaties van serologische markers van hepatitis B-virusinfectie en hun interpretatie

Serologische diagnose van virale hepatitis

m. Chisinau, Blvd. Traian 7/1 kaart

022 944 944 069 944 944 069 944 949
Ma - Vrij van 7.30 tot 19.00, za 8.00 - 13.00 uur

Als er niet voldoende klinische en epidemiologische gegevens zijn om de etiologie van hepatitis te veronderstellen, worden de volgende serologische markers in de eerste fase onderzocht:

  • HAVAb, IgM (acute hepatitis A)
  • HEVAb, IgM (acute hepatitis E)
  • HBsAg, HBcAb (hepatitis B)
  • HCVAb (hepatitis C)

In het geval van een positieve reactie op HBsAg en (of) totaal HBcorAb is verdere verduidelijking van de diagnostiek van het stadium van het infectieproces noodzakelijk, waarbij wordt getest:

Langdurige persistentie van HBcorAb, met negatieve testen van HBsAg en HBsAb, kan de enige marker zijn van chronische infectie met een mutante stam van hepatitis B.

Diagnose van co-infectie of superinfectie met het hepatitis Delta-virus:

Voor een positieve reactie op HCVAb is aanvullend onderzoek nodig:

  • HCVAb, IgM
  • HCVAb-proteïnespectrum in ELISA of immunoblot
  • HCV, RNA

Om de prognose van hepatitis C en de respons op interferontherapie te beoordelen, raden wij aan HCV te typen.

Diagnostische markers van virale hepatitis en klinische interpretatie van de resultaten

marker

definitie

Klinische interpretatie

Hepatitis A-markers

Hepatitis E-markers

Hepatitis B-markers

Hepatitis D-markers (delta)

Hepatitis C-markers

Hepatitis G-markers

De aanbevolen hoeveelheid onderzoek vóór het vaccineren:
Vóór vaccinatie voor het hepatitis B-virus is het noodzakelijk om een ​​onderzoek uit te voeren:

De identificatie van een hoge titer van beschermende antilichamen: HBsAb geeft aan dat de infectie al is overgedragen, dat er een stabiele immuniteit is en dat vaccinatie niet nodig is. Positieve reacties op HBsAg en HBcAb die de aanwezigheid van een infectie aangeven, vereisen een individuele beslissing over de geschiktheid van de introductie van het vaccin.

Bron: USAID, Ministerul Sanatatii al Republicii Moldova. Diagnosticul de laborator al Hepatitelor virale B, C si D. Instructiuni metodice, 2007

In het geval van negatieve reacties bij de detectie van markers van virale hepatitis A, B, C en D, moet hepatitis veroorzaakt door Epstein-Barr-virussen en cytomegalie worden uitgesloten:

  • CMV, IgG
  • CMV, IgM
  • EBV Early Antigen, IgG
  • EBV Nuclear Antigen, IgG
  • EBV VCA (capside-antigeen), IgG
  • Epstein Barr Virus VCA (capside antigeen), IgM

LABORATORIUM DIAGNOSTIEK VAN VIRALE HEPATITIS

A. A. Asratyan Institute of Epidemiology and Microbiology N.F.Hamal en RAMS,
Medische Academie van Moskou. IMSechenov

De basis van laboratoriumdiagnostiek van virale hepatitis zijn:

- kennis van hun pathogenen en replicatie

- informatie over het verschijnen en verdwijnen van infectiemarkers

- moderne immunochemische en moleculair biologische methoden voor het detecteren van antigenen, antilichamen en nucleïnezuren /

Laboratoriumdiagnostiek van hepatitis B (HB) De structuur van het virion, zie fig. 1.

Laboratoriumdiagnostiek van hepatitis B - gebaseerd op de identificatie van antigenen specifiek voor HBs en de overeenkomstige antilichamen in het bloed, evenals virale nucleïnezuren, waarvan de belangrijkste zijn:

anti-HBs klasse Ig M en IgG

NVE Ag - anti-NVE

De meest gebruikte bij de diagnose van HBs is de definitie van HBsAg. Dit antigeen wordt gedetecteerd in zowel acute als chronische ziekten (echter, acute infectie wordt gewoonlijk bevestigd door de aanwezigheid van hoge titers van anti-HBc IgM). In acute HBV wordt het oppervlakte-antigeen van het virus gedetecteerd na 3-5 weken vanaf het moment van infectie, dat wil zeggen, lang voordat de klinische symptomen van de ziekte beginnen en in deze gevallen de enige serologische marker is. HBsAg wordt constant gedetecteerd in de preicterische en icterische perioden van de ziekte. De persistentie van HBsAg gedurende 6 maanden of langer duidt op een langdurig of chronisch verloop van de ziekte en suggereert een chronische dragertoestand van het virus. Eliminatie van HBsAg en het verschijnen van antilichamen ervoor is een onmisbare voorwaarde voor herstel. Serologische markers van HBV-replicatie zijn anti-HBs van de IgM-klasse, HBeAg, DNA en DNA-polymerase, die worden gedetecteerd in acuut HBV vanaf de eerste dagen van klinische manifestaties en kunnen worden gedetecteerd tijdens exacerbatie van chronisch HBV. Serologische markers van HBV-replicatie worden zowel voor algemene diagnostiek als voor de evaluatie van de effectiviteit van de gebruikte therapie bepaald. HBcAg wordt gedetecteerd in het leverweefsel en wordt niet gedetecteerd in serum. Gemedieerd door zijn aanwezigheid in het lichaam weerspiegelen circulerende antilichamen - Igc en IgG tegen Igc. In de acute periode van HB is de aanwezigheid van anti-HBc klasse IgM een extra marker van deze ziekte. Er moet echter rekening mee worden gehouden dat ongeveer 50% van de patiënten met chronische hepatitis B deze antilichamen ook in de periode van exacerbatie kan hebben, maar vaker in lage concentraties. De aanwezigheid van alleen anti-HBc klasse IgG in serum wordt waargenomen tussen het verdwijnen van HBsAg en de vorming van anti-HBs. De gecombineerde detectie van anti-HBc klasse IgG in lage titer met anti-HBs geeft een overgedragen HB-infectie en de aanwezigheid van immuniteit aan. Het testen van HBeAg wordt uitgevoerd in bloedserum alleen met de aanwezigheid van HBsAg en het positieve resultaat van deze marker duidt op een actief proces - ofwel bevestigt de diagnose van acute HBV of duidt op een exacerbatie van chronische HB. De duur van de circulatie van HBeAg heeft een belangrijke prognostische waarde: de identificatie van HBeAg 2 of meer maanden na het begin van de ziekte duidt op een mogelijke ontwikkeling van chronische hepatitis. De detectie van HBeAg zonder de aanwezigheid van HBsAg in het serum geeft in de meeste gevallen een fout resultaat van de analyse aan. Patiënten die zijn geïnfecteerd met het mutante virus kunnen echter seronegatief blijven voor HBeAg, ondanks de persistentie van infectiviteit en de aanwezigheid van anti-HBe. De aanwezigheid van HBV-DNA (de meest gevoelige marker van aanhoudende HBV-replicatie) in het serum duidt op een hoge infectiviteit van dit monster en actieve reproductie van het virus in het lichaam. Een positief resultaat kan worden geregistreerd in bijna alle patiënten met acuut HBV in het midden van de ziekte. Het verlagen van de concentratie bij de behandeling van chronische hepatitis is een goed prognostisch teken dat de effectiviteit van de gebruikte therapie aangeeft. De hoge activiteit van serumaminotransferasen weerspiegelt inflammatoire schade aan het leverweefsel, voornamelijk veroorzaakt door reacties van het immuunsysteem van het lichaam tegen hepatocyten die met het virus zijn geïnfecteerd, en niet door het directe cytopathische effect van het virus. Een hoog gehalte aan HBV-DNA in combinatie met een laag niveau van aminotransferasen duidt op een onvoldoende immuunrespons van het organisme. Detectie van anti-HBe in afwezigheid van HBeAg en HBV DNA geeft aan dat actieve replicatie van de infectie is beëindigd. Seroconversie van HBsAg in anti-HBs komt voor bij 90-95% van de patiënten met acute HBs in het stadium van de resolutie van het infectieuze proces en is een indicator voor immuniteit tegen het HBV-virus, dat wil zeggen dat de aanwezigheid van anti-HBs een infectie en de aanwezigheid van immuniteit tegen deze infectie aangeeft. Personen die deze antilichamen in een beschermende concentratie (10 IE of meer) hebben, lijden niet aan HS en hoeven niet te worden gevaccineerd. Alle toegepaste onderzoeksmethoden voor de bepaling van specifieke markers van HB kunnen worden onderverdeeld in 2 groepen - immunochemisch en moleculair biologisch. Immunochemisch - de belangrijkste plaats behoort tot de enzymgekoppelde immunosorbenttest (ELISA) met zijn hoge gevoeligheid en specificiteit, gemakkelijke implementatie en stabiliteit van reagentia. Moleculaire biologische - punt- en vloeistofhybridisatie, evenals de keten polymerasereactie (PCR) - stelt u in staat om de aanwezigheid van HBV-DNA te detecteren, hetzij door het bepalen van het virus-specifieke enzym - DNA-polymerase. HB sAg / anti-HBs Om de hoofdmarker van HBV te identificeren, zijn een aantal verschillende methoden ontwikkeld om het antigeen te bepalen bij concentraties tot 0,05 ng / ml, die zijn onderverdeeld in zogenaamde "generaties" (Tabel 1). Momenteel is de belangrijkste methode voor het detecteren van HBsAg ELISA Een belangrijke stap in de ontwikkeling van laboratoriumdiagnostiek van virale hepatitis in Rusland is het uitvoeren (sinds 1998) van vergelijkende tests van diagnostische producten om hun kwaliteit te beoordelen onder de auspiciën van het ministerie van Volksgezondheid van de Russische Federatie. Moderne diagnostische producten hebben een hoge specificiteit, maar fout-positieve resultaten zijn mogelijk. Om valse positieven te onderscheiden van echt positieve resultaten, wordt een neutralisatietest van HBsAg, een specifiek serum, gebruikt. Fundamenteel nieuw voor het HBsAg-detectiesysteem was de vereiste voor binnenlandse fabrikanten van diagnostische geneesmiddelen - de verplichte opname in het testsysteem van een zwak positief controlemonster met HBsAg in een concentratie van 1 ng / ml. Om anti-HBsAg te bepalen, werd het hele spectrum van immunochemische methoden getest, waarvan de belangrijkste nu ELISA is (voor kwalitatieve en kwantitatieve analyse). Anti-HBc klasse Ig M en IgG, HBe Ag - anti-HBe (Fig. 2 en Tabel 2) Voor het testen van deze markers kunnen verschillende soorten vaste fase immunoassay worden gebruikt: immuno-enzym, radio-immunoassay, chemiluminescent en hun verschillende varianten. HBV-DNA wordt bepaald door PCR-analyse. Momenteel zijn de meest gebruikte amplificatiemethoden voor het detecteren van HBV-DNA. Het is nu mogelijk om het HBV-DNA in kwalitatieve en kwantitatieve vorm te bepalen.

Laboratoriumdiagnostiek van hepatitis D (DG) Het hepatitis-D-virus (IOP) is een defect virus dat een single-helical RNA bevat dat de hulp van het HBV-virus nodig heeft voor replicatie om envelopeiwitten te synthetiseren die bestaan ​​uit HBsAg, dat wordt gebruikt om het IOP-genoom in te kapselen. IOP behoort niet tot een van de bekende families van dierlijke virussen, met zijn eigenschappen bevindt de IOP zich het dichtst bij de viroïden en satellietvirussen van planten. Laboratoriumdiagnostiek wordt uitgevoerd door het detecteren van serologische markers van IOP, waaronder de aanwezigheid van antigeen, antilichamen er tegen, en IOP RNA. Detectie van IOP-antigeen en IOP-RNA in serum- of leverweefsel geeft de aanwezigheid van actieve HG-infectie aan, maar er moet worden opgemerkt dat deze markers mogelijk niet worden gedetecteerd in het serum van patiënten met fulminante HD. De marker voor actieve IOP-replicatie is ook anti-IOP-klasse IgM. Serologische markers van ZvH-infectie hangen af ​​van hoe het virus werd verkregen - in de vorm van co-infectie met HBV (bij de meeste patiënten heeft de ziekte een acuut beloop en eindigt bij herstel) of superinfectie bij patiënten met chronische HBV-infectie (het is moeilijker dan co-infectie - 10% ontwikkelt fulminante hepatitis). Bij co-infectie in de meeste gevallen worden antilichamen - anti-IOP-klasse IgM en IgG - gedetecteerd in de loop van de ziekte. De anti-IOP-titer wordt gewoonlijk na herstel tot vrijwel niet-detecteerbare niveaus teruggebracht en er blijven geen serologische markers achter die een persoon ooit met IOD is geïnfecteerd. IOP-antigeen wordt gedetecteerd bij slechts 25% van de patiënten en verdwijnt meestal met het verdwijnen van HBsAg. Bij superinfectie bij patiënten met chronische HBV-infectie, heeft het serologische beeld de volgende karakteristieke kenmerken: - de HBsAg-titer wordt verminderd tegen de tijd dat het IOP-antigeen in het serum verschijnt; - IOP-antigeen en RNA-IOP worden nog steeds gedetecteerd in serum, omdat bij de meeste patiënten met HG-superinfectie (70-80%) meestal chronische infectie optreedt, in tegenstelling tot gevallen van co-infectie; - Er worden hoge antilichaamtiters (anti-IOP) van zowel de IgM-klasse als IgG bepaald, die tot in het oneindige blijven bestaan. Serologische markers van het DG van het virus bepaald met behulp van enzymimmunoassay en radioimmunoassay-analyse, en RNA-IOP - door de werkwijze van polymerasekettingreactie. Binnenlandse en buitenlandse industriële biotechnologische bedrijven produceren diagnostische kits, inclusief alle benodigde componenten en reagentia voor de test. Bij diagnostische preparaten wordt een delta-antigeen gebruikt dat is afgeleid van de marmot-lever die experimenteel is geïnfecteerd met HD; antigeen geïsoleerd uit de lever van dode dragers van IOP; Delta-antigeen, verkregen door genetische manipulatiemethode.

Laboratoriumdiagnostiek van hepatitis C (HS) De ontdekking van het veroorzakende agens van HS is mogelijk geworden dankzij de methoden van de moleculaire biologie in 1989-1991. Eerst werd het virale genoom verkregen door klonen uit het serum van patiënten met hepatitis "ni-A, ni-B" en vervolgens werd de structuur van het virus zelf vastgesteld. De fysisch-chemische karakterisering van het virus maakte het mogelijk HCV te classificeren als een familie van flavovirussen. Het genoom van het HS-virus (HCV) wordt voorgesteld door enkelstrengs positief RNA, bestaande uit 10.000 nucleotide basen, die gebieden vormen die coderen voor drie structurele eiwitten (C, E1, E2) en vijf niet-structurele (NS2, NS3, NS4, NS5). Een kenmerk van HCV is de extreem hoge heterogeniteit van het genoom. Analyse van RNA-HCV-nucleïnezuren van verschillende isolaten onthulde significante verschillen in hun primaire structuur. Op basis van deze gegevens werd een classificatie van HCV gebouwd, die ze verdeelde in varianten (6-9) en subtypen-genotypen, waarvan sommige aanwezig zijn in alle regio's van de wereld, en andere alleen in individuele landen. Laboratoriumdiagnostiek van HS werd opgelost met moderne methoden van moleculaire biologie, aangezien wanneer HS het virus zich in extreem lage concentraties bevindt en zijn antigenen niet beschikbaar zijn voor detectie met behulp van moderne indicatiemethoden, de onderzoekers hun inspanningen richten op het detecteren van antilichamen tegen verschillende antigene componenten van het virus, waarvan de detectie kan plaatsvinden. Geef de aanwezigheid van een virus aan. De gebruikte antigenen waren eiwitten gecodeerd door de structurele en niet-structurele zone van het RNA-HCV, verkregen met behulp van recombinante technologie of synthese (de polypeptiden die worden gebruikt in moderne immunologische werkwijzen zijn C22-3; C33c, C100-3, C200, NS5, S-1-1 ). Laboratoriumdiagnose van HS is gebaseerd op de detectie van serologische markers van HCV: antilichamen tegen het HS-virus (anti-HCV, anti-HCV-IgM, IgG) door middel van ELISA en RNA-HCV met behulp van PCR. Tot op heden zijn 4 generaties testsystemen ontwikkeld voor het detecteren van anti-HCV in de ELISA-methode, maar de eerste generatie ELISA wordt momenteel niet gebruikt vanwege zijn lage gevoeligheid. RNA-HCV is een indicator van actieve replicatie van HCV en de vroegste marker van infectie en kan worden gedetecteerd door de polymerasekettingreactie zo snel als 1-2 weken na infectie, kort voor de toename in serumtransaminase-niveaus. Anti-HCV wordt gedetecteerd door 5-6 weken na het begin van hepatitis in 80% van de gevallen en tegen week 12 bij 90% van de personen die enzymimmunoassay gebruiken. Bij het bepalen van anti-HCV wordt in sommige gevallen een vals-positieve reactie geregistreerd. Om vals-positieve monsters te onderscheiden van monsters die daadwerkelijk antilichamen tegen HCV bevatten, zijn aanvullende tests ontwikkeld - recombinante immunoblotting, bepaling van het spectrum van anti-HCV-eiwitten. Immunoblottende diagnostica maken het mogelijk om niet-specifieke resultaten die zijn verkregen door ELISA uit te sluiten, maar een visuele beoordeling van immunoblottingsbanden kan in verschillende diagnostische centra ambigu zijn. In ons land zijn binnenlandse bevestigende enzymimmuuntest-testsystemen (de zogenaamde Spektr-systemen), die gebaseerd zijn op de detectie van antilichamen tegen specifieke virale antigenen: kern, NS3, NS4ab, NS5a, meer wijdverspreid geworden. Detectie van HCV-RNA wordt beschouwd als de "gouden" standaard bij de diagnose van HS en bevestiging van positieve resultaten van anti-HCV-detectie. Momenteel wordt PCR in kwalitatieve en kwantitatieve vorm gebruikt om HCV-RNA aan te duiden. De gevoeligheid van methoden voor het bepalen van HCV-RNA neemt elk jaar toe, bereikt momenteel 10-50 kopieën RNA in 1 ml bloed. De diagnose van chronische HS bij personen met anti-HCV wordt meestal gemaakt op basis van verhoogde hepatische tests gedurende meer dan 6 maanden.

Laboratoriumdiagnostiek van hepatitis A (HA) Het HA-virus (Fig. 3) is een RNA-bevattend 27 nm-virus, geclassificeerd als picornavirus. In alle isolaten die in verschillende delen van de wereld worden verzameld, is er slechts één HAV-serotype. HAV heeft geen buitenste omhulsel, maar bestaat uit een buitenste eiwitcapsule of capside, die positief enkelstrengig RNA binnenin bevat, dat werkt als een matrijs voor de productie van virale eiwitten in de gastheercel. De laboratoriumdiagnostiek van HA is gebaseerd op de detectie van markers van het HA-virus - HAV-antigeen, antilichamen (anti-HAV-IgM en IgG), evenals HAV-RNA. Het laatste bewijs van een huidige of recente infectie is de aanwezigheid in het serum (zelfs in één serummonster) antilichamen tegen IgA-klasse IgM (anti-HAV IgM) en de aanwezigheid van HAV in feces. De aanwezigheid van antilichamen tegen HA, evenals langdurige immuniteit, wordt aangegeven door de aanwezigheid van antilichamen tegen HAV-IgG-klasse (anti-HAV-IgG). De diagnose van acuut HA wordt bevestigd in een acuut of vroeg stadium van herstel in de aanwezigheid van anti-HAV IgM-klasse, die verschijnen in de laatste 5-10 dagen van de incubatieperiode en nog steeds worden gedetecteerd gedurende 6-7 maanden vanaf het begin van de ziekte. Bovendien kunnen deze antilichamen in de eerste maanden worden gedetecteerd bij individuen (20-30%) die zijn gevaccineerd met geïnactiveerd HA-vaccin. Hun vorming is geassocieerd met de primaire immuunrespons op de introductie van het antigeen en niet op de infectie veroorzaakt door het vaccin. HAV-RNA kan enkele dagen voor de toename van de ALT-activiteit en binnen 5 tot 59 dagen aan ziekte met een typisch HA-verloop worden gedetecteerd; in langdurige gevallen kan HAV-RNA gemiddeld tot 95 dagen worden gemeten. Het antigeen van het HA-virus (HAV-Ag) wordt gevonden in de ontlasting van patiënten 7-10 dagen vóór het begin van klinische symptomen en in de eerste dagen van de ziekte, die ook wordt gebruikt voor vroege diagnose en identificatie van bronnen van het infectieuze agens. De concentratie van HAV in de feces is het hoogste gedurende 2 weken. voor het verschijnen van geelzucht. Bij volwassenen duurt de uitscheiding van het virus met uitwerpselen meestal minder dan een week na de verschijning van geelzucht. Het virus werd echter ook na 2 maanden gedetecteerd. vanaf het begin van de ziekte (tijdens exacerbatie). Kinderen kunnen het virus langer uitscheiden dan volwassenen, mogelijk binnen een paar weken na de klinische manifestatie van de ziekte. Chronische ontlading van HAV door ontlasting wordt niet waargenomen. De definitie van HAV-antigeen heeft ook toepassing gevonden in de hygiënische virologie bij de studie van water voor de aanwezigheid van een virus. IgG van de anti-HAV klasse (Fig. 4) verschijnt ook vroeg in het begin van de ziekte (van 3-4 weken), blijft het hele leven bestaan ​​en biedt levenslange bescherming tegen deze ziekte. De definitie van anti-HAV IgG wordt gebruikt om de immunologische structuur van de populatie en de dynamiek van specifieke humorale immuniteit te bestuderen. De bepaling van de anti-HAV IgG-klasse is ook belangrijk voor pre- en post-vaccinatiescreening (de minimale beschermende concentratie van anti-HAV komt overeen met 20 IE / l). Voor hun vastberadenheid produceren binnenlandse fabrikanten commerciële diagnostische enzymimmunoassay-preparaten. Laboratoriumdiagnostiek is gebaseerd op detectie van markers van het HA-virus met behulp van specifieke immunodiagnostische methoden - ELISA- en RIA-methoden. Binnenlandse en buitenlandse industriële biotechnologische bedrijven produceren diagnostische kits, inclusief alle benodigde componenten en reagentia voor de test. Naast de vaste fase ELISA en RIA worden ook de methode van immuno-elektronenmicroscopie en de PCR-methode met succes toegepast. Alle bovengenoemde methoden van immunodiagnostiek met gelijke waarschijnlijkheid onthullen onduidelijke, niet-symptoomloze of klinisch uitgesproken vormen van HA. Een speciale plaats in de laboratoriumdiagnostiek van GA wordt ingenomen door moleculair genetische testmethoden voor HAV-RNA. PCR-diagnostiek kan HAV-RNA detecteren in een concentratie van 40 kopieën / ml. Momenteel is er een opeenstapeling van gegevens over de plaats van PCR in het systeem van laboratoriumdiagnostiek van GA.

Laboratoriumdiagnostiek van hepatitis E (HEU) Het etiologische agens van hepatitis E (HE) is een sferisch virus zonder de buitenste schil: het is een enkelstrengs RNA-virus met een diameter van ongeveer 32-34 nm. Bij het stellen van een diagnose van HE in elk afzonderlijk geval, moeten verschillende diagnostische argumenten in overweging worden genomen: - de patiënt heeft een symptoomcomplex van acute en vermoedelijk infectieuze hepatitis, - een betrouwbare uitzondering op de etiologische deelname van HA- en HBV-virussen, op basis van negatieve serologische tests - anti-HAV IgM-klasse en anti-HBs van de IgM-klasse - een grondige analyse van de epidemiologische geschiedenisgegevens, inclusief indicaties van recente bezoeken aan endemische regio's, - een onderzoek (indien mogelijk) van uitwerpselen pijn de aanwezigheid van virusdeeltjes door immuno-elektronenmicroscopie CGU, PCR. Er zijn diagnostische methoden gebaseerd op het gebruik van immunofluorescerende antilichamen (MFA's) voor de bepaling van HEV-antigeen in feces en enzymgebonden immunosorbentassay (ELISA) voor de bepaling van antilichamen tegen HEV - anti-HEV van IgM en IgG. De aanwezigheid van anti-HEV klasse IgM met een hoge frequentie wordt bepaald in de sera van patiënten met CU in het acute stadium van de ziekte en in de periode van vroeg herstel; de identificatie van anti-HEV IgG-klasse duidt op een eerdere HU-infectie. Voor de diagnose van GE wordt ook het HEV-RNA bepaald. Binnenlandse fabrikanten van diagnostische testsystemen voor de detectie van virale hepatitismarkers:

MOSKOU en de regio - NEARMEDIC - ECOlab - BIOSERVICE

NOVOSIBIRSK - VECTOR BESTE - VECTOR MBS (MEDICOBIOL.SOYUZ) - VECTOR NAAR BIALGAM

LAGERE NOVGOROD - MICROGEN (voorheen IMBIO) - DIAGNOSTISCHE SYSTEMEN ST. PETERSBURG - AVICENNA - AQUAPAST


Meer Artikelen Over Lever

Cyste

Blauwe lamp met geelzucht bij pasgeborenen

Laat een reactie achter 122.712Een vrij groot percentage baby's uit de eerste levensdagen lijdt aan geelzucht. Deze ziekte manifesteert zich tegen de achtergrond van een toename van bilirubine in het bloed van een pasgeborene.
Cyste

Wat maakt galstenen?

Galsteenziekte (cholelithiasis) is een pathologie waarbij stenen (stenen) worden gevormd in de galblaas of in de galwegen. De ziekte komt vrij vaak voor, in de afgelopen decennia neemt het aantal mensen dat lijdt aan pathologie, toe.